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    湖 南 中 医 学 院 实 验 报 告
    实验名称:建春抗癌合剂对宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制实验
     
           1.目的
         观察建春抗癌合剂对宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。
         
          2. 实验材料
         2.1 细胞株:人宫颈癌HeLa细胞购自湖南医科大学肿瘤所。
         2.2  BALB/c裸鼠:购自中南大学动物中心。
         2.3 药物:实验药物为建春抗癌合剂,对照药物为环磷酰胺。
         2.4 试剂:1640培养基,小牛血清,胰蛋白酶,苔盼蓝,抗生素等。
         2.5 器材:超净工作台,倒置显微镜,CO2培养箱,层流柜,移液器,细胞培养板,培养瓶,游标卡尺等。
        
          3. 实验方法
         3.1 细胞培养:1640培养基加小牛血清和双抗,培养HeLa细胞,制备指数生长期细胞悬液(1.0×107/ml)。
         3.2 裸鼠喂养:按裸鼠饲养要求,水、垫草和饲料均经高温或紫外线灭菌。在相对无菌条件下饲养一周,无异常者才进行接种实验。
         3.3 接种:在无明显异常裸鼠的右腋处皮下注射HeLa细胞悬液(1.0×107/ml)0.5ml。每天观察裸鼠活动情况,并作记录,隔天精确测量肿瘤大小,每周照相2次。
         3.4 分组和治疗:待肿瘤生长达到一定体积后,将其随机分为四组,三组分别局部注射建春抗癌合剂、环磷酰胺、生理盐水,剩余一组不予任何处理作为空白对照。使用剂量均参照人体常用剂量按通用公式折算,隔日用药一次。继续每日观察裸鼠活力。治疗两周后,处死动物,解剖肿瘤,称量瘤重,计算抑瘤率。
         3.5 瘤体病理组织学观察:处死动物后,解剖肿瘤,取部分瘤体于10%福尔马林中固定,石蜡切片,常规光镜观察。
        
          4. 结果
         4.1 治疗前后各组移植瘤体积的比较:见表1。
     
    表1 治疗前后各组移植瘤体积的比较(cm3

      组别      
    n
    治疗0天
    治疗5天
    治疗10天
    治疗15天
    体积变化
    建春抗癌合剂(I)
    环磷酰胺(II)
    生理盐水(III)
    空白对照组(IV)
    10
    5
    5
    5
     0.465±0.020
     0.457±0.014
     0.462±0.017
     0.469±0.015
     0.669±0.031
     0.858±0.026
     0.986±0.024
     0.969±0.021
     0.776±0.032
    1.284±0.040
    1.426±0.093
    1.642±0.090
     0.695±0.035
    2.149±0.128
    2.524±0.149
    2.706±0.035
    +0.238±0.031
    +1.883±0.066
    +2.062±0.148
    +2.244±0.026

         4.2 治疗前后各组移植瘤折算重量的比较:见表2
     
    表2 治疗前后各组瘤体重量的比较(g)

      组别      
    n
    治疗0天
    治疗5天
    治疗10天
    治疗15天
    体积变化
    建春抗癌合剂(I)
    环磷酰胺(II)
    生理盐水(III)
    空白对照组(IV)
    10
    5
    5
    5
     0.459±0.014
     0.438±0.015
     0.466±0.008
     0.459±0.023
     0.637±0.026
     0.848±0.023
     0.941±0.046
     0.952±0.023
     0.738±0.043
    1.238±0.089
    1.400±0.090
    1.592±0.048
     0.631±0.029
    2.054±0.080
    2.521±0.100
    2.626±0.088
    +0.172±0.026
    +1.540±0.080
    +2.046±0.094
    +2.167±0.072

          4.3 用药各组抑瘤率的比较:见表3
     
    表3 用药组与空白对照组抑瘤率的比较(%)

      组别      
    n
    抑瘤率(%)
    建春抗癌合剂(I)
    环磷酰胺(II)
    生理盐水(III)
    空白对照组(IV)
    10
    5
    5
    5
    75.97
    21.78
    4.04
    ——

         4.4 治疗前后各组裸鼠照片:见图1。图Ia、IIa、IIIa、IVa分别示治疗前各组(依次为建春抗癌合剂治疗组、环磷酰胺组、生理盐水组、空白组)裸鼠的移植瘤;图Ib、IIb、IIIb、IVb分别示治疗两周各组裸鼠的移植瘤;图Ic、IIc、IIIc、IVc分别示治疗两周各组解剖之瘤体。
     
          用解剖刀从正中剖开瘤体,观察切面,见建春抗癌合剂组瘤体颜色暗黑,瘤体内部液化,表面干枯,结成硬壳,切面细胞大片状坏死;环磷酰胺组与阴性对照组无明显差异;阴性对照组瘤体较硬,切面较完整;空白对照组瘤体颜色鲜艳,瘤体硬,切面完整。各组瘤体包膜完整,均无脏器转移。
     
         4.5 病理组织学观察:各组石膜切片显微照相(见图2),治疗组与对照组存在明显差异。建春抗癌合剂治疗组显示癌细胞坏死明显,可见大片均质性无细胞区域,癌巢结构消失。生理盐水对照组和空白对照组显示癌巢结构典型,癌细胞结构清晰,增生活跃,坏死不明显。

         4.6 药物毒性:环磷酰胺组治疗两周后,所有裸鼠均死亡,全身青紫;而建春抗癌合剂组、生理盐水组和空白对照组无明显异常表现。
     
          5. 结论:
       
         5.1 治疗各组瘤体体积比较:由表1数据绘制成瘤体体积增长曲线(见图3),用药各组治疗前后体积差值均低于阴性对照组和空白对照组,但只有建春抗癌合剂组差值有显著性意义,瘤体增长缓慢,且有下降趋势。环磷酰胺组治疗前后瘤体体积差值与对照组相差不大,疗效较差。
     

         5.2 治疗各组瘤体重量比较:由表2数据绘制成瘤体重量增长曲线(见图4),用药各组治疗前后瘤重差值均低于阴性对照组和空白对照组,但只有建春抗癌合剂治疗组差值有显著性意义。环磷酰胺组治疗前后瘤体重量差值与对照组相差不大,疗效较差。
     
          5.3 用药组抑瘤率比较:由表3可知,建春抗癌合剂组抑瘤率明显大于环磷酰胺组,存在显著性差异。
     
          5.4 治疗各组瘤体病理组织学比较:建春抗癌合剂组瘤细胞大片状坏死,呈均质性无细胞结构区;生理盐水对照组病理组织学图像与空白对照组相似,瘤细胞坏死现象不明显,癌巢结构典型。
     
          5.5 药物毒性:环磷酰胺组治疗两周后,受试裸鼠全部死亡,系该药物的毒副作用所致;建春抗癌合剂组的受试裸鼠不仅无明显异常反应,而且裸鼠活力强,表明该药无明显毒副作用。

     

     

      建春抗癌口服液急性毒性试验资料

     

            一、实验材料

               1.1 药物:建春抗癌口服液(现名:建春抗癌合剂,下同),由湖南省湘潭市雨湖区中医肿瘤研究所(现名:湘潭建春医院)提供,批号981110,含鲜药材量0.55g/ml,临用时浓缩至9.17g/ml(此为最大浓度)。

         1.2 动物:清洁级昆明种小鼠,20~22g70只,雌雄各半,湖南医科大学实验动物学部提供。动物均自由饮食,实验温度20~25

             二、方法与结果

    10只小鼠预试,1g测不出LD50,故进行最大耐受量测定。

    取小鼠60只,20~22g,雌雄各半,随机分三组,每组20只,隔食12小时后,灌胃建春抗癌口服液浓缩液0.8ml/20g,第一组给物1次,第二组给药2次,第三组给药3次,每次给药间隔6小时,给药后连续观察7天动物的毒性反应,包括行为、活动、精神状态、食欲、大小便以及毛发、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物。体重变化及死亡情况。结果第一组无一只动物死亡,第二组死亡4只,第三组死亡6只。未死动物体重平均增加25%。第八天处死动物,解剖,肉眼观察心、肝、脾、肾、肺、胃、肠等主要脏器,未见异常,结果小鼠ig建春抗癌口服液每日最大耐受量为367g/kg(鲜药量),相当于临床50公斤人一日用量(100ml/次,三次/日,共165g/50kg=3.3g/kg 鲜药量)的111倍。

              三、结论

    建春抗癌口服液口服367g鲜药/kg,相当于临床50kg成人一日用量的111倍,未见毒性反应,提示本品毒性小,在临床推荐的用药量下使用是安全,但若超过此量,则显示一定的毒性。

     
     
     
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